1.目的
规范P230‖高效液相色谱系统的使用和维护。
2.范围
本规程适用于P230‖高效液相色谱系统的使用和维护。
3.职责
仪器室分析人员负责P230‖高效液相色谱系统的日常使用和维护。
4.系统组成
本系统由P230‖高压恒流泵、UV230‖紫外-可见检测器、RO230溶剂管理器、Rheodyne7725i手动进样阀、EC2006色谱工作站/计算机以及打印机组成。
5．程序
5.1.准备
5.1.1. 使用前应根据待检样品的检验方法准备所需的流动相（色谱纯：流动相必须用0.45μm滤膜过滤）、配置样品和标准品（必须用0.45μm滤膜过滤）、选择合适的色谱柱（柱进样口位置应与流动相流向一致）、与7725进样阀配套的进样器和定量管。
5.1.2. 通电前应检查仪器设备之间的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。
5.2 开机和泵操作
5.2.1. 开机
5.2.1.1．接通电源，依次打开RO230溶剂管理器、P230‖泵、UV230‖检测器，待仪器自检结束显示正常状态后，打开打印机、电脑显示器、计算机。
5.2.2. 更换溶剂
5.2.2.1. 打开P230‖泵后，打开放空阀（逆时针转动放空阀手柄至90度）；
5.2.2.2. 将一小烧杯放在放空阀出口管下以收集流出的流动相；
5.2.2.3. 按冲洗键使泵用最大流量对流动相进行更换，也可使用配件中的20ml吸液针管连接到放空阀出口管进行抽取；
5.2.2.4. 流动相更换完毕后将放空阀顺时针拧紧，这样泵前管路的流动相更换完毕；
5.2.2.5. 运行P230‖泵，更换系统其它部分流动相（进样阀、色谱柱及检测器）；注：进样阀处于INJECT位置，更换定量管中的流动相
5.2.2.6. 待基线走平后，系统流动相基本彻底更换；
5.2.3. 排气泡
5.2.3.1 确定P230‖泵是停止运行的，同时系统实际压力为0时，打开放空阀；
5.2.3.2. 使用配件中的20ml吸液针管连接到放空阀出口管处进行抽取；
5.2.3.3. 确保FEP输液管及溶剂过滤头没有气泡；
5.2.3.4. 如沉子有污染，则抽取溶剂过程中会有大量的气泡出现。
5.2.3.5. 在不影响其它操作的情况下，可将溶剂瓶放到尽量低的位置，便于抽净气泡，待气泡抽净后再放到仪器托盘中。
5.2.4. 打开工作站
5.2.4.1. 点击EC2006启动图标，按『确定』，进入系统主界面。点击仪器控制菜单，弹出系统配置、仪器控制及光谱扫描选项，点击系统配置，将仪器列表中的仪器选项添加到系统配置选项中去后，（以实际仪器配置为准）点击验证系统配置，如显示结果与系统配置中选项一致，证明系统连接正常，电脑可对仪器进行反控。点击仪器控制选项，对泵的流量、梯度曲线进行设置，同时对检测波长及柱温箱温度设定确认后，启动数据采集。则泵会按电脑设定流量开始运行。
5.2.4.2. 检查泵、检测器及柱温箱的显示是否按工作站设定运行。
5.3. 平衡系统（分两种情况进行）
5.3.1. 等度模式
5.3.1.1. 每次用1ml/min的甲醇冲洗系统最少10min。
5.3.1.2. 检查管路连接、柱接口及泵头处是否漏液，如漏液应予以排除。
5.3.1.3. 观察泵控制面板上的压力值，压力波动如在0.5MPa以上，可初步判断为柱前管路仍有气泡，重复5.2.3.下的步骤。
5.3.1.4. 压力波动平稳后，按检验方法规定的流动相比例冲洗系统。在检查基线稳定性前，让最少5～6倍柱体积的流动相通过系统。
5.3.1.5. 在EC2006窗口点击基线监测图标（上数第四个快捷键），观察基线和压力变化。如果10分钟后基线漂移﹤100μv，噪音﹤500μv数量级，或纵坐标设为-10mv～10mv，最后10分钟基线显示为水平直线，且压力平稳时，可认为系统已达到平衡状态，可以进样。
5.3.1.6. 按结束当前数据采集图标（上数第六个快捷键），停止监视基线。
5.3.2. 梯度模式
5.3.2.1. 按检验方法规定的条件冲洗平衡系统，并注意压力波动变化和排气泡。
5.3.2.2. 在进样前运行1～2次空白梯度。
5.4. 进样
5.4.1. 进样前，进样阀处于INJECT位置，将EC2006窗口处于数据采集等待状态，按启动数据采集图标（上数第五个快捷键）。
5.4.2. 用试样溶液清洗注射器3次以上，抽取适量并排除气泡后。
5.4.2.1. 如按部分装液法，用微量注射器进样时，并要求每次进样体积准确、相同。
5.4.2.2. 如按完全装液法，用定量环定容进样时，进样量应不小于定量环体积的5倍（5～10倍准确性更佳）。
5.4.3. 将注射器针完全插入进样阀入口中。
5.4.4. 将进样阀手柄转动至Load位置，平稳地注入试样溶液，除另有规定外，让注射器留在进样阀上，将进样阀手柄快速转动至INJECT位置，系统将自动运行采集数据并记录图谱。
5.4.5. 让进样阀手柄保持在INJECT位置，将注射器从进样阀中拔出。
5.5. 数据处理（外标法）和打印
5.5.1. 左键按系统左界面下的定量图标，选择用标样计算的项目，弹出样品的定量方法设置窗口。
5.5.2. 在窗口上按右键，分别点击打开标准样品、设置标准样品、计算定量曲线三步。
5.5.2.1. 在打开标准样品窗口中，逐项添加所要加的标准样品谱图。
5.5.2.2. 计算定量曲线则得出标准一次曲线；
5.5.2.3. 点击文件选项，点击打开中的打开数据，调出待测样品的谱图。
5.5.2.4. 点击查看组份表与积分结果按键（上数第八快捷键）；
5.5.2.5. 在打开窗口内点击右键，点击使用时间窗口，再点击计算浓度；
5.5.2.6. 如列表中没有浓度选项，点击右键属性，选取浓度选项。则列表中可计算出未知样品的浓度。
5.5.3. 打印
5.5.3.1. 选中要打印的样品谱图，点击打印信息设定图标（上右数第八个快捷键），在窗口中输入相应的实验条件、打印头及在峰参数选择中添加需输出的组份表选项。
5.5.3.2. 按打印预览，检查无误后，打印结果。
5.6. 清洗系统和关机
5.6.1. 数据采集完毕后，继续用流动相将系统冲洗10min。
5.6.2. 清洗进样阀（可以在系统冲洗过程中）
5.6.2.1. 用20ml注射器吸10ml流动相；
5.6.2.2. 将清洗头（Rheodyne部件号7125-054）连接到注射器出口上（不带针头），并将它们一起接到进样阀的进样导管上；
5.6.2.3. 使进样阀保持在INJECT位置，慢慢将流动相推入，流动相将通过注射针导入口、引导管、注射针导入管和注射针密封圈，由样品溢出管排出。再用空气将清洗液吹干。以上操作反复3次。
5.6.3. 清洗色谱柱
5.6.3.1. C18柱用甲醇或乙腈冲洗20min。确保基线最少10分钟为直线。
5.6.3.2. 如有盐溶液，C18柱先用10%甲醇水以1ml/min冲洗40min以上，再用甲醇或乙腈冲洗。
5.6.4. 关机
5.6.4.1. 数据处理完成后，关闭工作站所有窗口，在主界面下退出EC2006软件系统，再依次关闭计算机、显示器、打印机。
5.6.4.2. 系统清洗完成后，现将泵流速降到0，待泵压力显示为0时再依次关闭泵、检测器、溶剂管理器、柱温箱最后关闭电源。
5.6.5. 填写[P230‖高效液相色谱系统使用记录。